破碎技术具有局限性,不能诱导片段化

发布日期:2017-10-19

轨道阱分析仪于1999年由马卡罗夫发明,新型质量分析仪采用了最新的仪器制造技术。离子在轨道阱中被俘获,并围绕着一个中心纺锤状电极轨道运动。这些离子以它们的质荷比值频率特性,沿着轴线做谐波振荡,同时诱导外电极产生镜像电流,这些电流通过傅里叶变换到时域中,从而产生质谱。常用的碎裂方法,MS/MS是一种生物分子鉴定和分类的关键技术。高效的碎裂过程是MS方法中必不可少的。各种不同的碎裂技术对应着不同的机制产出不同的片段产物。

碰撞诱导解离(CID)是最广泛使用的MS/MS技术。在这种碎裂技术中,列举蛋白和肽类物质作为一个例子,它们的正电荷的离子与惰性气体原子(例如,氩气)的多次碰撞产生内部热量。这导致肽键(C—N键)断裂,从而产生一系列的b-和y-片段离子。


出国看病找爱诺美康,破碎技术在生成大于15个氨基酸的肽、与完整蛋白质的序列信息时,并不是非常高效。同时,它也具有其固有的局限性,它不能诱导内部的片段化,它使一些中性分子比如水分子和氨分子带上电荷,并且会带来一些翻译后的修饰,例如磷酸化。这是因为这些反应活化能较低。

电子俘获解离(ECD)始于1998年,它的原理是多重质子化的肽、或蛋白质阳离子俘获热电子,并且诱导主链在N-C a键处断裂产生c-和z-片段离子。ECD使范围更加广的片段化,使得MS/MS谱更加丰富,序列的覆盖率更加广,并且能够保持翻译后不稳定修饰的状态。这种破碎技术是自上而下地分析完整蛋白质的强大工具。ECD的主要限制是成本较高且FTICR仪器操作复杂。

电子转移解离(ETD)这项技术始于2004年,电子从低电子亲和力的阴离子,传递给多质子肽段离子,引发主链片段化产生c系和z系离子。ETD MS/MS对于小型到中型的肽都具有很好的序列覆盖率,并且与蛋白质组鉴定中传统的CID方法,高度互补ETD在长肽段和完整蛋白质的顺序离子反应,质子转移和电荷消减(PTR)的分析方面很有用。

由ETD得到的带多电荷的片段,经过偶数电子阴离子的去质子化后,产生一价或二价离子。这可以分析蛋白质的N-端或C-端的15〜40个氨基酸。目前,ETD正应用于不稳定的翻译后修饰的分析,这些修饰包括磷酸化和糖基化。