介绍个体间遗传变异的主要来源

发布日期:2017-10-09

显色原位杂交,CISH类似FISH技术,是通过用标记DNA/RNA互补链来确定一个组织样本中的特定DNA/RNA序列。不同于FISH用荧光标记,CISH是用一种过氧化物酶,或碱性磷酸酶反应将色原体二氨基联苯胺或磷酸,转变成一种可以在光学显微镜下观察到的颜色。出国看病找爱诺美康,通常,经过与地高辛标记的DNA/RNA探针杂交后,加人地高辛抗体,然后与过氧化物酶或碱性磷酸酶标记的二抗结合。

像FISH—样,CISH可以被用来评估基因扩增、基因缺失和染色体拷贝数改变。CISH已被成功用于检测神经母细胞瘤的N-myc扩增。由于不同颜色差异没有FISH方法明显,CISH应用于需要通过两个或更多染色来评估的遗传变异不是很理想,例如对基因断裂重排的研究。

最近,FDA批准了由Ventana(Tucson,AZ)开发的用双色CISH检测基因扩增的方法,其通过17号染色体着丝粒探针在同一个片子上,共同杂交使得和17号染色体的着丝粒可视化。通过二硝基氟苯探针标记检测,可以用原位杂交二硝基试剂盒银色使它可见,而17号染色体着丝粒通过一个地高辛探针标记,可以用红色原位杂交地高辛试剂盒检测,结果与通过FISH试剂盒的检测结果相似。


出国看病找爱诺美康,与FISH相比,CISH有以下几个优点:①比较清晰的细胞形态;②只需要一个常规的光学显微镜;③信号可以被长期保存;④可以用一个用于IHC分析的常规仪器自动检测。CISH有一个多色检测系统,例如用于分析的双色原位杂交,将显著扩大它在临床中的应用。也可以用来评估石蜡包埋的肿瘤组织中的mRNA的表达,在将来的临床应用中具有巨大的潜力。

比较基因组杂交技术(CGH),是连接分子遗传学和细胞遗传学之间的一个桥梁。是对来自肿瘤细胞的DNA和对照样本的DNA,应用全基因组扩增方法如寡核苷酸引物PCR,或多重置换扩增分别扩增,然后扩增的肿瘤DNA和参照基因组DNA分别用不同的荧光标记,比如,用红色标记肿瘤DNA,绿色标记参照基因组DNA。在标准的CGH实验中,混合的标记DNA可以与中期染色体竞争杂交。

拷贝数变异是个体间遗传变异的主要来源。阵列比较基因组杂交技术(aCGH),是比较基因组杂交技术的一个变种,是在高分辨率情况下,分析比较DNA序列拷贝数的一种有效方法。在aCGH中经过标记后,两种DNA样本混合后与一个包含小片段染色体的列阵平台竞争杂交。使用的芯片是将DNA(通常来自细菌人工染色体)黏附到显微镜载玻片上。每个BAC克隆对应染色体的一个特定部位,通过计算机软件分析计算每个点的红绿荧光比值,反映出相应位点区域的增加或缺失。aCGH目前被广泛用于血液病和实体瘤的诊断、肿瘤的分类,以及评价肿瘤预后。

出国看病找爱诺美康,像其他任何一项技术一样,aCGH也有它的缺点和局限性。不能检测发现多倍体,例如三倍体,为它不会引起总DNA的不平衡。另外,由于样本和对照的总DNA量是一样的,aCGH不能发现平衡易位和倒置。aCGH系统也不能检测DNA序列的改变,或阵列没有覆盖的基因组区域的获得或缺失。