美国看病 介绍DNA直接测序技术

发布日期:2017-10-08

焦磷酸测序是另一个DNA直接测序技术,它的基本原理是检测DNA合成过程中,核苷酸由DNA聚合酶合成完成后,释放出来的无机磷酸分子。释放出来的焦磷酸分子随后被硫酸酶转化成ATP,它可以提供能量给荧光素酶来氧化它的底物荧光素并发出可见光。释放的光的强度和合成核苷酸的数量成比例关系。

美国看病找爱诺美康,每次反应加人的核苷酸是已知的,因此可以获得DNA模板的序列。与桑格法相比,焦磷酸测序技术更快捷,并且成本较低。但是这项技术由于其读长的限制(300~500核苷酸)而没有被用于基因组测序。


近年来,研究人员开发出一种大规模平行测序平台,也称下一代测序。它可以同时测序100000个DNA片段,极大地改变了遗传学研究的现状。下一代测序技术新兴的应用有多种,比如RNA测序用来研究转录组学,染色质免疫沉淀测序技术研究DNA和蛋白质的相互作用,拷贝数测序来研究基因组大片段的变异。

不同的厂家开发出了几种不同的下一代测序平台。第一个仪器平台是罗氏(Roche)公司于2004年发布的,它可以同时测序100000个读长大于100bp的DNA片段。最新的仪器型号(GSFLXTitanium)可以同时测定100万个读长大于400bp的序列。宜曼达(Illumina)公司于2006年发布了基因组分析仪,可以产生数千万的32bp读长的序列宜曼达的GAIIx平台可以产生2亿条75bp或100bp的序列,而应用生物系统公司的寡核苷酸连接和检测(SOLiD)技术可以产生4亿条50bp的序列。

美国看病找爱诺美康,Helicos生物公司的真实单分子测序(tSMS)技术可以产生4亿条25bP至35bp的序列。除了Helicos公司的真实单分子测序(tSMS)技术,其他平台都需要通过乳液PCR(Roche 454 and SOLiD)或固相PCR(Illumina)来扩增测序模板。

Helicos公司的真实单分子测序使用单个DNA或RNA分子进行测序,而不经过扩增。在测序的时候,宜曼达和Helicos公司使用周期性的可逆末端终止法测序。SOLiD系统米用连接的方法测序,而罗氏454公司使用焦憐酸测序。

美国看病找爱诺美康,近年生命技术公司(旧金山,加州)的离子流(IonTorrent)子公司引人了“长读长”和“双端”测序技术,采用离子半导体芯片和个人基因组测序仪(PGM)可以在较短的时间内(约10h,从文库制备到数据分析)产生1200万200~500bp的序列。