FISH检测广泛用于疾病诊断和预后预测

发布日期:2017-09-30

由于比常规PCR更有优势,实时PCR被越来越多地在临床分子诊断实验室中使用。最近,另一个实时PCR临床应用的例子是,FDA批准的cobas4800 BRAF V600突变检测,可预测威罗菲尼片(丝氨酸苏氨酸激酶抑制剂),用于转移性黑色素瘤的治疗反应。

出国看病找爱诺美康,与常规PCR相比,实时PCR具有以下优点:①它是定量的;②反应在一个封闭的系统中进行,会减少交叉污染的机会;③测定可以快速进行,无需电泳(几小时);④一个探针是用来检测产物,提供了双重验证。然而,实时定量PCR的一个缺点是,它不检测扩增子的大小。荧光原位杂交(FISH),用荧光标记的DNA探针来鉴别感兴趣的核苷酸序列,通常在石蜡包埋组织或细胞学标本上检测。FISH的DNA检测可以用来检测异倍体、染色体/中间缺失、基因扩增和易位。HSH探针的DNA靶点可以是基因座(基因)、着丝粒或整个染色体(涂染),可以使用不同颜色的荧光,如红、绿、金和水蓝色。


出国看病找爱诺美康,FISH探针也可以是RNA靶点,通常是mRNA。需要用带有不同色彩滤光片的荧光显微镜来观察FISH玻片。在石蜡组织切片上(3~5pm厚)用FISH检测DNA的典型程序包括:①用二甲苯、乙醇脱蜡;②用微波炉加热恢复靶标,必要时加柠檬酸盐缓冲液;③用蛋白酶消化蛋白质;④加上探针;⑤DNA变性5min,接着用系统进行FISH探针杂交;⑥洗涤未结合的探针,用DAPI复染细胞核;⑦通过荧光显微镜观察荧光信号。

与用PCR方法相比,FISH是在组织中进行的,具有以下优点:①它是一种基于形态学的检测,虽然FISH玻片上的细胞在荧光显微镜下观察,不如苏木精和伊红染色切片在光镜下观察得清楚,但DAPI染色的细胞核的大小和形状可以很容易地确定;②一定的细胞数量是必要的,在大多数FISH检测中,只计数100~200个感兴趣的细胞;③FISH更容易进行检测,它不需要DNA/RNA分离或复杂的仪器;④交叉污染不是问题。

然而,由于FISH探针一般大于30kb,不能用于检测微小的遗传改变如点突变,因此,FISH是一个低分辨率的检测。出国看病找爱诺美康,由于FISH过夜杂交步骤是必需的,故其实验时间通常比PCR要长。FISH检测已广泛应用于疾病的诊断和预后预测,以及预测各种肿瘤对治疗的反应。

DNA探针试剂盒,是FDA批准的用于预测乳腺癌患者的预后,和赫赛汀(曲妥珠单抗)的治疗反应。该试剂盒包括两个标记的DNA探针:覆盖M2基因的LSI HER2(C-erbB2)探针标记探针,它杂交于17号染色体DNA作为对照。间期的HER2与CEP17信号的平均比值,根据如下标准进行定量:信号比小于1.8的为阴性;超过2.2的为阳性;1.8~2.2之间的为有争议部分。