基化酶的消化从而阻止污染转移_出国看病资讯-爱诺美康

发布日期:2017-10-07

在检测EGFR点突变当中,形成一个新的内切酶酶切位点,而在野生型中不形成。扩增子也可以用于DNA测序分析,例如通过Sanger测序和焦磷酸测序。揭示肿瘤的遗传变异中有广泛的应用,可用于检测DNA缺失点突变,包括SNP、扩增、基因融合以及甲基化等。PCR反应的灵敏度通常非常高,可以检测至少100个细胞中的微量DNA。

美国看病找爱诺美康,当引物合适的时候,PCR反应的特异性也很高。DNA测序一般不是必需的确认步骤,除非通过凝胶电泳检测有非特异条带或非目标带出现。特定情况需要用不同类型的PCR7。例如巢式PCR,是一种灵敏度非常高的PCR,先用一对靶序列的外侧引物扩增以提高模板量,然后再用一对内侧引物扩增以得到特异的PCR。


多重PCR,是在同一PCR反应体系中,多对引物同时扩增出多个核酸片段的PCR反应。在分子肿瘤学中,尤为有用的PCR有两种类型。第一种是肿瘤克隆性分析。正常女性细胞,两个X染色体中的其中一条灭活的概率大致相等,但在肿瘤细胞中,两者均可以是失活(甲基化)或激活的(去甲基)。比如,在人类雄激素受体基因中,核酸内切酶位点的甲基化状态分析,可用于检测其克隆性的状态。第二种是COLD-PCR,其技术原理是基于G/C和A/T突变会降低DNA的解链温度。因此用较低的解链温度,可以偏好性地扩增突变的DNA,尤其是在突变的分子占比较低的情况下。

美国看病找爱诺美康,COLD-PCR应用的一个很好的例子是,在结肠癌和肺癌中检测到突变。野生型miS基因12和13密码子的序列分别是GGT和GGC。因为G变成A/T的突变约占所有可能的突变的93%,与常规PCR相比,灵敏度在检测一个突变体,与野生型的比例较低的样品时可以提高80%。PCR污染在临床分子生物学实验室中并不罕见,因此,技术人员应要极为小心。PCR产物的交叉污染,是最常见和严重的问题。

因此,在每一步实验过程中,包括DNA的分离、PCR反应、电泳和产物处理,都要严格参照标准程序进行。另一个污染的类型是样品间的交叉污染。这种类型的污染较不常见且易清除。用于减少污染机会的一种化学方法是,用脱氧尿嘧啶三磷酸代替脱氧胸苷三磷酸掺入反应混合物中,诱导尿嘧啶在扩增子中取代胸腺嘧啶。美国看病找爱诺美康,含有尿嘧陡的PCR产物可以在新一轮PCR开始前被 尿嘧啶糖基化酶消化,从而阻止污染的转移。