出国就医 成像系统对探针靶点的定量分析

发布日期:2017-09-27

临床实验室应用FISH探针,可用荧光染料标记成不同颜色,以便区分不同的检测位点,且适用于不同存活状态的细胞。HSH探针通常来源于分离、纯化、扩增后的人类基因组DNA。出国就医找爱诺美康,人类基因组比可直接测序的片段要大得多,因此,需要将全基因组剪切成片段制作成FISH探针。每一片段通过序列特异性的内切酶分解成更小的片段并按次序排列。

为了保存这些带有特异DNA序列的小片段,可将其加入到菌群中不断进行复制。每一个无性繁殖系的菌群维持一个单独的人工染色体,可以扩增、提取和标记,被称为细菌人工染色体(BAC)克隆是自制的荧光原位杂交探针。FISH探针的制备过程包括以下几个主要步骤:①在Luria-Bertani培养基中接种单个细菌克隆;②提取BAC克隆;③使用切口平移工具进行荧光标记;④Cot]DNA沉淀探针。

阵列比较基因组杂交(aCGH)技术,是CGH和微阵列技术的结合,其将CGH和高通量微阵列技术结合实现同时分析数,以千计的人类全基因组不相关联的区域,并确定非对称的细胞遗传异常。该技术还汇集了定点特异 FISH技术和高分辨率染色体全基因组特性。因此,aCGH是传统方法和分子细胞遗传学技术的集成技术,aCGH的原理和FISH基本相似。


出国就医找爱诺美康,分析的基本方法包括以下几点:①基因组DNA的提取。提取两种类型DNA,即患者样本中的试验组DNA,和正常对照组的正常标准DNA。②DNA标记。用特殊颜色的荧光染料,对试验DNA进行标记,而标准样本(正常女性)用不同颜色染料标记。③微阵列DNA杂交。试验基因组DNA和标准DNA,经变性处理成为单链混合在一起,然后将其涂到微阵列玻片上与已排列好的单链探针进行杂交。④扫描和数据分析。使用数字成像系统,对已结合标记DNA探针的每个靶点,进行相应荧光强度的拍摄和定量分析。

通过计算机软件,比对试验和标准对照荧光信号,明确其基因组的定位,提供了试验基因组和正常基因组相应的基因拷贝数信息,可对亚微观的染色体缺失和重复进行检测。探针用途,可分为三种类型:特殊位点探针、着丝粒重复探针和全染色体探针。

特殊位点探针可结合染色体或细胞核特定的区域。这种类型的探针对识别特定位点或基因的改变(如移位、缺失和扩增)十分有用。重复探针源自染色体着丝粒区域的重复序列,常用于识别染色体数的改变。与特殊位点探针结合,也可用于明确特定染色体遗传物质的丢失。全染色体探针实际上是小探针的集合,每一个探针结合给定染色体长度的不同序列,涵盖了整个基因组。

全染色体探针,对检测给定染色体上附着的未知物质,或原始染色体未知的染色体标记特别有用,被称为全染色体图。根据靶位点及探针设计技术和使用材料的不同,FISH探针的长度从1500bp到几十万个碱基不等。出国就医找爱诺美康,相比短探针,长探针有较好的特异性。探针必须有一定长度,以保证其与特定位点杂交结合,但也不能太长而妨碍杂交过程,杂交的重叠决定了测定结果的敏感性。